介绍一种海参皂苷的制备工艺的制作方法

将乐信息网 http://www.jianglexinxi.cn 2020-10-18 13:25 出处:网络
这里写的介绍一种海参皂苷的制备工艺的制作方法,小编为您精心整理 本发明属于提取领域,具体涉及一种海参皂苷的制备工艺。

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本发明属于提取领域,具体涉及一种海参皂苷的制备工艺。



背景技术:

海参是棘皮动物门海参纲动物,是一种营养丰富并具有较高药用价值的海产品。海参皂苷由苷元和糖链通过β-糖苷键连接,主要分为海参烷型、非海参烷型,是海参中最早被分离出的一类皂苷成分。研究表明,海参皂苷具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒等生物活性,因此海参皂苷的提取备受关注。目前,主要的提取方法有:水提取法、醇提取法、水-醇提取法等,上述方法得到的海参皂苷纯度一般不高,往往需要经过进一步的色谱分离,才能获得较高纯度的产品,步骤多、成本高、且提取率低。针对上述问题,本发明提供一种工艺简便、提取率高的海参皂苷制备工艺。



技术实现要素:

本发明提供一种海参皂苷的制备工艺,其特征在于包括如下步骤:

(1)将干海参粉碎至20-100目,加入体积分数20%-40%的乙醇溶液和α-葡萄糖苷酶,混合均匀,调ph4.8-5.4,于50-55℃,搅拌12-24h,过滤,滤液浓缩得浓缩物;

(2)将步骤(1)得到的浓缩物分散于水中,加入有机溶剂a萃取1-3次,收集水层,水层用有机溶剂b萃取1-4次,收集有机相,浓缩得粗提物;

(3)将步骤(2)得到的粗提物溶于45-50℃水中配成饱和溶液,保持45-50℃,搅拌下,滴加丙酮直至出现沉淀,停止滴加丙酮,并自然冷却至室温后,静置过夜,过滤、干燥,即得海参皂苷。

步骤(1)中所述20%-40%的乙醇溶液的用量为干海参质量的6-8倍,α-葡萄糖苷酶的用量为干海参质量的2%-3%,α-葡萄糖苷酶的活力为500-1000u/mg;

步骤(2)中水的用量以能充分溶解浓缩物为宜,优选每克浓缩物使用20-50ml水,有机溶剂a选自乙醚、石油醚或正己烷;有机溶剂b选自正丁醇、水饱和正丁醇、正戊醇或水饱和正戊醇;有机溶剂a每次的用量为水用量的0.5-1.0倍,有机溶剂b每次的用量为水用量的1.0-3.0倍。

本发明制备工艺得到的海参皂苷的主要成分为holothurina和echinosidea,其含量在90%以上。

与现有技术相比,本发明的优点在于:本发明通过在提取过程中加入α-葡萄糖苷酶有效降低了提取液中海参多糖等大极性杂质,使得海参皂苷纯度在90%以上,极大地提高了海参皂苷的提取效率。

附图说明

图1是实施例1制备的海参皂苷的hplc图,峰形加粗部分为杂质;

图2是实施例3制备的海参皂苷的hplc图,峰形加粗部分为杂质。

具体实施方式

为了便于对本发明的进一步理解,下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则,本发明的实施方式不限于以下内容。

实施例1

(1)将干海参(格皮氏海参,1.0kg)粉碎至20-100目,加入体积分数20%的乙醇溶液(8.0kg)和α-葡萄糖苷酶(500u/mg,30g),混合均匀,调ph4.8-5.4,于50-55℃,搅拌24h,过滤,滤液浓缩得浓缩物(143.5g);

(2)取步骤(1)得到的浓缩物(20g)分散于水(500ml)中,加入乙醚萃取2次(500ml×2),收集水层,水层用正丁醇萃取3次(1.5l×3),收集有机相,浓缩得粗提物(5.69g);

(3)将步骤(2)得到的粗提物(5.69g)溶于45-50℃水中配成饱和溶液,保持45-50℃,搅拌下,滴加丙酮直至出现沉淀,停止滴加丙酮,并自然冷却至室温后,静置过夜,过滤、干燥得固体粉末(4.21g,hplc分析holothurina和echinosidea总含量为92.3%,图1)。

实施例2

(1)将干海参(梅花参,1.0kg)粉碎至20-100目,加入体积分数40%的乙醇溶液(6.0kg)和α-葡萄糖苷酶(1000u/mg,20g),混合均匀,调ph4.8-5.4,于50-55℃,搅拌12h,过滤,滤液浓缩得浓缩物(79.6g);

(2)取步骤(1)得到的浓缩物(20g)分散于水(400ml)中,加入石油醚萃取3次(200ml×3),收集水层,水层用正戊醇萃取4次(400ml×4),收集有机相,浓缩得粗提物(3.65g);

(3)将步骤(2)得到的粗提物(3.65g)溶于45-50℃水中配成饱和溶液,保持45-50℃,搅拌下,滴加丙酮直至出现沉淀,停止滴加丙酮,并自然冷却至室温后,静置过夜,过滤、干燥得固体粉末(2.46g,hplc分析holothurina和echinosidea总含量为91.5%)。

实施例3

(1)将干海参(格皮氏海参,1.0kg)粉碎至20-100目,加入体积分数20%的乙醇溶液(8.0kg)混合均匀,调ph4.8-5.4,于50-55℃,搅拌24h,过滤,滤液浓缩得浓缩物;

(2)取步骤(1)得到的浓缩物(20g)分散于水(500ml)中,加入乙醚萃取2次(500ml×2),收集水层,水层用正丁醇萃取3次(1.5l×3),收集有机相,浓缩得粗提物(6.05g);

(3)将步骤(2)得到的粗提物(6.05g)溶于45-50℃水中配成饱和溶液,保持45-50℃,搅拌下,滴加丙酮直至出现沉淀,停止滴加丙酮,并自然冷却至室温后,静置过夜,过滤、干燥得固体粉末(4.08g,hplc分析holothurina和echinosidea总含量为62.4%,图2)。

实施例4

(1)将干海参(格皮氏海参,1.0kg)粉碎至20-100目,加入体积分数30%的乙醇溶液(7.0kg)和α-葡萄糖苷酶(700u/mg,25g),混合均匀,调ph4.8-5.4,于50-55℃,搅拌18h,过滤,滤液浓缩得浓缩物;

(2)取步骤(1)得到的浓缩物(20g)分散于水(1000ml)中,加入乙醚萃取1次(1000ml×1),收集水层,水层用水饱和正丁醇萃取2次(1.0l×2),收集有机相,浓缩得粗提物(5.56g);

(3)将步骤(2)得到的粗提物(5.56g)溶于45-50℃水中配成饱和溶液,保持45-50℃,搅拌下,滴加丙酮直至出现沉淀,停止滴加丙酮,并自然冷却至室温后,静置过夜,过滤、干燥得固体粉末(4.12g,hplc分析holothurina和echinosidea总含量为92.9%)。

本发明实施例中hplc分析的色谱条件如下:

流动相a:乙腈

流动相b:0.1%醋酸的水溶液

色谱柱:安捷伦zorbaxsb-c18(4.6×150mm,5μm)

洗脱梯度:0-5-20-30-35(min):30%-30%-50%-60%-30%(a相)

流速1.0ml/min,进样量:20μl,检测波长:205nm,柱温:30℃。


技术特征:

1.一种海参皂苷的制备工艺,其特征在于包括如下步骤:

(1)将干海参粉碎至20-100目,加入体积分数20%-40%的乙醇溶液和α-葡萄糖苷酶,混合均匀,调ph4.8-5.4,于50-55℃,搅拌12-24h,过滤,滤液浓缩得浓缩物;

(2)将步骤(1)得到的浓缩物分散于水中,加入有机溶剂a萃取1-3次,收集水层,水层用有机溶剂b萃取1-4次,收集有机相,浓缩得粗提物;

(3)将步骤(2)得到的粗提物溶于45-50℃水中配成饱和溶液,保持45-50℃,搅拌下,滴加丙酮直至出现沉淀,停止滴加丙酮,并自然冷却至室温后,静置过夜,过滤、干燥,即得海参皂苷。

2.权利要求1所述的制备工艺,其特征在于步骤(1)中所述20%-40%的乙醇溶液的用量为干海参质量的6-8倍。

3.权利要求1-2任一项所述的制备工艺,其特征在于步骤(1)中α-葡萄糖苷酶的用量为干海参质量的2%-3%,α-葡萄糖苷酶的活力为500-1000u/mg。

4.权利要求1-3任一项所述的制备工艺,其特征在于步骤(2)中有机溶剂a选自乙醚、石油醚或正己烷。

5.权利要求1-3任一项所述的制备工艺,其特征在于步骤(2)中有机溶剂b选自正丁醇、水饱和正丁醇、正戊醇或水饱和正戊醇。

6.权利要求1-5任一项所述的制备工艺,其特征在于步骤(2)中有机溶剂a每次的用量为水用量的0.5-1.0倍,有机溶剂b每次的用量为水用量的1.0-3.0倍。

7.权利要求1-6任一项所述的制备工艺,其特征在于所述海参皂苷的主要成分为holothurina和echinosidea,其含量在90%以上。

技术总结
本发明涉及一种海参皂苷的制备工艺,包括如下步骤:(1)将干海参粉碎至20‑100目,加入体积分数20%‑40%的乙醇溶液和α‑葡萄糖苷酶,混合均匀,调pH 4.8‑5.4,于50‑55℃,搅拌12‑24h,过滤,滤液浓缩得浓缩物;(2)将步骤(1)得到的浓缩物分散于水中,加入有机溶剂A萃取1‑3次,收集水层,水层用有机溶剂B萃取1‑4次,收集有机相,浓缩得粗提物;(3)将步骤(2)得到的粗提物溶于45‑50℃水中配成饱和溶液,保持45‑50℃,搅拌下,滴加丙酮直至出现沉淀,停止滴加丙酮,并自然冷却至室温后,静置过夜,过滤、干燥,即得海参皂苷。

技术研发人员:陈敏
受保护的技术使用者:扬州蓝色生物医药科技有限公司
技术研发日:2018.12.19
技术公布日:2020.06.26

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